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1. 硫酸铵盐析法
原理：高浓度硫酸铵竞争性结合水分子，破坏蛋白质表面的水化层，使蛋白质相互聚集沉淀。不同蛋白的沉淀饱和度不同，可用于分级分离。
离心要求：
将饱和硫酸铵缓慢加入蛋白溶液中，置冰上搅拌30–60分钟。
离心参数：10,000–15,000×g，4℃，15–20分钟。
作用：高速离心可将已经形成的蛋白沉淀团块完全收集，避免轻细颗粒悬浮。上清可进一步增加硫酸铵浓度以沉淀另一组分。
2. 有机溶剂沉淀（丙酮/乙醇）
原理：极性有机溶剂降低水的介电常数，削弱蛋白质与水的相互作用，同时可能引起蛋白质构象变化。
离心要求：
加入预冷的丙酮或乙醇（通常为样品体积的2–4倍），-20℃静置至少1小时。
离心参数：12,000–15,000×g，4℃，10–15分钟。必须高速，因为有机溶剂中的沉淀颗粒极轻且分散，低速离心几乎无法沉淀完全。
沉淀后小心倾倒上清，干燥后复溶。
3. 三氯乙酸（TCA）沉淀法
原理：TCA使蛋白质变性并形成不溶性的盐复合物，常用于稀溶液蛋白的浓缩，也用于去除SDS等干扰物质。
离心要求：
终浓度10–20% TCA，冰上静置15–30分钟。
离心参数：14,000×g，4℃，10–15分钟。TCA沉淀产生的颗粒极小，高RCF才能形成肉眼可见的紧实沉淀。
沉淀需用预冷丙酮洗涤1–2次（再次短暂高速离心）。
4. 等电点沉淀
原理：调节pH至目标蛋白的等电点（pI），此时蛋白净电荷为零，分子间作用力最小，易聚集沉淀。
离心要求：
缓慢加入稀酸或稀碱，同时监测pH值，静置30分钟。
离心参数：10,000×g，4℃，15分钟。高速离心有助于收集松散的聚集物。
